To Örebro University

Introduktion/Syfte: Det har föreslagits att indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) blir aktiverat vid utveckling av cancer och hjälper tumörer att undgå eliminering av immunsystemet. Syftet med denna studie var att optimera ett immunohistokemi protokoll för detektion av IDO i normal prostatavävnad, för att användas i en framtida studie där IDO:s roll vid initiering av prostatacancer ska undersökas. I dagsläget finns inget immunohistokemi protokoll för detektion av IDO i normala prostatavävnad.

Material och metod: Normal prostatavävnad användes för att testa olika protokoll för att optimera färgningskvalitén. Vi färgade också in prostatavävnad innehållande både normal- och cancerområden. Tonsill användes som positiv kontroll. Immunohistokemi genomfördes med polymer-tekniken och vid optimering, ändrades en parameter vid respektive ny körning. De parametrar som ändrades var temperatur vid värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) vid förbehandling, inkubationstid av proben och koncentration på anti-IDO1 antikroppen. Korrekt färgning med anti-IDO1, färgar in cytoplasma och membran av IDO positiva celler.

Resultat och slutsats: Efter att ha testat fyra olika protokoll varianter, etablerades ett protokoll med god sensitivitet och specificitet. Färgning i den positiva kontrollen detekterades i cytoplasma och membran hos IDO positiva celler. Ingen färgning detekterades i den negativa kontrollen. De slutgiltiga modifieringarna var; epitopåtervinning med HIER vid 110℃, inkubationstid för proben vid 15 minuter och en koncentration av antikroppen anti-IDO1 på 1:50.

Introduction/Aim: It has been suggested that indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) becomes activated during cancer development, helping tumor cells escape eradication be the immune system. The purpose of this study was to optimize an immunohistochemistry protocol for the detection of IDO in normal prostate tissue, to be used in a future study to investigate the role of IDO in prostate cancer initiation. At present, there is no immunohistochemistry protocol for detection of IDO in normal prostate tissue.

Materials and method: Normal prostate tissue sections were used to test different protocols in order to optimize the staining quality. We also stained prostate tissue sections containing both normal and tumor areas. Tonsil tissue sections was used as positive control. Immunohistochemistry was performed with the polymer technique and when optimized, one parameter was changed at each new run. The parameters that were changed were temperature at heat induced epitope retrieval (HIER) in pretreatment, probe incubation time and concentration on the anti-IDO1 antibody. Correct staining with anti-IDO1 would stain cytoplasm and membrane of IDO positive cells.

Results and conclusion: After testing four different protocol variants, a protocol with good sensitivity and specificity was established. Staining in the positive control was detected in cytoplasm and membrane of IDO positive cells. No staining was detected in the negative control. The key modifications were; antigen retrieval by using HIER at 110℃, incubation time for the probe 15 minutes and concentration on the anti-IDO1 antibody at 1:50.