Till Örebro universitet

Ledbroskskador är svåra att läka på grund av låg regenerationsförmåga hos kondrocyter och brist på blodkärl i brosket. Olika kirurgiska tekniker används för att bota ledbroskskador men ett effektivt sätt inte har funnits än. Matrix-Assisted Chondrocyte Implantation (MACI) är baserad på att odla friska celler i hydrogeler och invänta broskbildning i dessa. Sedan implanteras det nya brosket i patienten. Syftet med studien var att undersöka brosktillväxt i kitosan-baserade hydrogeler med immunohistokemiska och histokemiska metoder samt att mäta cell-viabilitet i hydrogelerna med Cell Titer Blue Assay. Kondrocyterna odlades i kitosan- baserade hydrogeler i fem veckor. Vid åtta tidpunkter fixerades hydrogelerna för immun/histokemisk analys, samt sparades CellTiter-Blue-reaktionsblandning för viabilitetsmätning. CellTiter Blue-mätningen visade ökning av antalceller i hydrogelerna över en 27-dagarsperiod. Efter 34 dagar sågs ingen signifikant förändring i förhållande till 27 dagar. Sirius Red visade efter 34 odlingsdagar begränsad kollagen bildning i hydrogelerna medan Hematoxylin-eosinfärgningar visade det efter 27 odlingsdagar. Aggrekan bildning kunde inte påvisas i hydrogelerna med Alcian blue eller Safranin-O. Immunohistokemi med antikroppar mot-kollagen II eller aggrekan kunde inte påvisa dessa bindvävskomponenter i hydrogelerna. Mindre porstorlek i hydrogelerna kan vara ett sätt att förbättra broskbildning. Optimering av antigen avmaskning för att kunna påvisa antigen i både hydrogelerna och kontroller diskuteras.

Damaged articular cartilage has a limited regenerative ability due to poor blood supply. Chondrocytes, are the main cells which are responsible for forming new cartilage, play a crucial role in this process. An effective therapy to heal damaged cartilage has not yet been found. Matrix-assisted chondrocyte implantation (MACI) represents new methods to heal cartilage injuries by seeding chondrocytes in hydrogels to grow new cartilage in vitro, which can later be implanted in the patient. The purpose of this study was to seed chondrocytes in Chitosan-based hydrogels in five weeks and investigate cartilage growth in hydrogels with immunohistochemical and histochemical methods and to measure cell viability in the hydrogels. Cell viability measurement showed an increase in the number of cells over 27 days in culture. After 34 days, there was no significant difference in relation to 27 days. Sirius red and hematoxylin-eosin stain revealed limited collagen formation in the hydrogels. Alcian blue or Safranin O could not reveal aggrecan formation in hydrogels. Immunohistochemistry with antibodies against collagen II or aggrecan could not reveal formation of aggrecan or collagen in the hydrogels. Smaller pore size can be a way to improve cartilage formation. Optimizing antigen retrieval methods to ensure that antibodies can effectively locate antigens are discussed.